腦立體定位儀技術(shù)與大小鼠實(shí)驗(yàn)具體操作方法

實(shí)驗(yàn)原理   

        腦立體定位技術(shù)被廣泛的運(yùn)用于腦的損毀、刺激和腦電記錄的精確定位中，成為研究腦結(jié)構(gòu)和功能必不可少的工具。腦立體定位技術(shù)主要是使用腦立體定位儀作為定位儀器，利用某些顱骨外面的標(biāo)志（如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等）或其它參考點(diǎn)所規(guī)定的三度坐標(biāo)系統(tǒng)，來確定皮層下某些神經(jīng)結(jié)構(gòu)的位置，以便在非直視暴露下對(duì)其進(jìn)行定向的刺激、破壞、注射藥物、引導(dǎo)電位等研究，是神經(jīng)解剖、神經(jīng)生理、神經(jīng)藥理和神經(jīng)外科等領(lǐng)域內(nèi)的重要研究方法。常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如大鼠、小鼠、貓等高等哺乳動(dòng)物以及鳥類，其均有完全的外耳道，可用（耳棒）來定位。在確定了顱外標(biāo)記之后，就可按腦立體定位圖譜所提供的數(shù)據(jù)進(jìn)行定位操作。實(shí)驗(yàn)器材腦立體定位儀，MC-5微操作儀，常規(guī)手術(shù)器械，鉆孔針，紗布，干棉球，酒精，0.4%戊巴比妥鈉（麻醉劑，現(xiàn)配現(xiàn)用），生理鹽水，1ml注射器，3%雙氧水， 小白鼠。

實(shí)驗(yàn)步驟

小鼠腦定位的系統(tǒng)大致分兩種：

（1） 用耳間線中心定位，首先將兩個(gè)耳棒尖端在定位儀滑道中間部位彼此相接觸（兩個(gè)耳棒讀數(shù)相同），旋緊鏍絲。然后取下一側(cè)耳棒，另一耳棒不動(dòng)。調(diào)節(jié)移動(dòng)推進(jìn)器，使校驗(yàn)電極尖端與耳棒尖端的中心點(diǎn)相觸，即為A點(diǎn)（即耳間線中心點(diǎn)），并記下刻度值。然后，將推進(jìn)器水平移動(dòng)到門齒鉤的上方，將門齒鉤平面與校驗(yàn)電極尖端相觸。這時(shí)就定出外耳道中心點(diǎn)與門齒牙板上面上沿之間的水平切面0點(diǎn)，記為H0。這時(shí)，動(dòng)物的前囟和后囟基本處在一個(gè)水平面上，相差0-0.1mm。另外，規(guī)定耳間線中心點(diǎn)以上為+，向下為-；向嘴側(cè)為+，向尾側(cè)為-。

（2）用顱骨標(biāo)志定位（常用前囟），即以前囟為嘴尾側(cè)0點(diǎn)，由前囟向嘴側(cè)為+，向尾側(cè)為-，其它與上面定位方法相同。

 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 

（1）動(dòng)物麻醉：小鼠，體重20-30g，稱重后以0.4%戊巴比妥鈉腹腔麻醉注射時(shí)必須緩慢，隨時(shí)注意動(dòng)物狀態(tài)。

（2）小鼠頭部固定：將小鼠的門齒固定于腦定位儀上頜固定器，然后把一側(cè)的耳捧推入動(dòng)物的外道后，使動(dòng)物的頭在處于兩滑道正中。再將另一耳捧推入另一側(cè)的外耳道。這時(shí)觀察兩個(gè)耳棒的刻度一致后，將兩耳棒上的固定螺絲扭緊，在將牙齒固定器上壓鼻環(huán) 2 壓下后扭緊（鼻環(huán)、耳棒的松緊度調(diào)節(jié)適宜為好），這時(shí)從各個(gè)方向推壓動(dòng)物頭部"均不會(huì)出現(xiàn)移動(dòng)。

（3）開顱鉆孔前的備皮：剪去動(dòng)物頭部毛，用2%碘酒及75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒，沿矢狀縫作一3cm長(zhǎng)的皮膚切口，分離皮下組織，用雙氧水清潔顱骨表面的筋膜及肌肉并剝離，推開骨膜，暴露前囟、人字縫及矢狀縫。

（4）確定標(biāo)準(zhǔn)中線：將金屬定位針向下移動(dòng)到矢狀縫上方后，再前后移動(dòng)定位針，使定位針定位到前囟。

（5）小鼠海馬定位：用定位針在前囟后2mm, 矢狀縫旁開2.5mm處定位一點(diǎn)，即為海馬的平面位置，然后在此點(diǎn)上用鉆孔針在顱骨上鉆一小圓孔。

（6）注射藥物：小鼠海馬則位于該圓孔下2 mm，將1ml注射器吸入藥物安置到MC-5微操作儀上，操作儀器使注射器針頭由小鼠腦鉆孔處下降2mm時(shí)完成藥物注射到小鼠腦海馬處。

（7）制作腦組織切片：將小鼠腦制作成切片，顯微觀察小鼠腦中紅染料位置來驗(yàn)證小鼠腦海馬定位是否準(zhǔn)確